蛋白质测序

Quantum-Si蛋白测序。

测序芯片如图,上面有200万个小孔,每个小孔是一个反应容器,检测反应就在这些小孔中发生。

测序步骤:

  1. 用限制性蛋白酶切断蛋白,多肽溶液铺在芯片上,芯片的小孔中有能与羧基端结合的化学物质。理想状态下,有三分之一的小孔结合一条肽,另外三分之一的小孔中会结合多条多态,还有三分之一的小孔中没有结合到多肽。

2. 在反应体系中加入识别子(recognizer),识别子能够识别蛋白质N末端的一个或多个氨基酸残基酸残基蛋白。不同的识别子带有不同颜色的荧光染料。

    3. 识别子与不同残疾结合的时间长短不同。PS610与F残基结合的时间为2.49s,与Y结合的时间为0.73s,与W结合的时间为0.31s。

    4. 加入蛋白外切酶和识别子,边降解边测序。当遇到没有识别子能识别的残基时,就会有空档期。通过控制外切酶的浓度,保证30分钟左右切掉一个残基。

    目前测得最长肽段是18个氨基酸。

    残基距离N端越远,被切下来的时间越长。

    脯氨酸不会被外切酶切割,识别信号会停留在脯氨酸之前的那个残疾。

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