Illumina的SNP芯片

这款芯片上主要布满了无数的小孔,每个小孔刚好可以放入一个微珠。每个微珠上都只含有同一种序列,但是数量很多,可能有几十万个。这上面的序列包含73个碱基,前23个序列是地址序列,剩下的50个是探针序列。地址序列用来识别探针序列,探针序列用于与目标DNA互补。

通过荧光标记的互补序列,可以通过荧光信号的位置和强度来识别每个小孔中微珠的Address序列,结果保存在.dmtp文件中,是后期分析中的重要。

Illumina使用的芯片扫描仪,只能识别2种颜色,而碱基有4种,需要一些巧妙的设计来区分。

二硝基苯用来修饰A或T,生物素修饰C和G。同时,红色荧光标记的二硝基苯抗体(与二硝基苯结合),绿色荧光标记的链霉亲和素(与生物素结合)。当探针连接到待测碱基前一个时,那么,就可以根据荧光的颜色区分出A:C、A:G、T:C、T:G了。

当探针序列覆盖到待测碱基上时,会出现两种情况:(1)覆盖的碱基互补,则连接下一个碱基,发光;(2)覆盖的碱基不互补,则不能再连上碱基,不发光。若检测A碱基的探针不发光,而检测T碱基的探针发光,则目标是一个A碱基的纯合子,反之则是T碱基的纯合子。若A和T碱基的探针都发光,则是A-T杂合子。

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